Ваше Здоровье. Самара
МАТЕРИАЛЫ
ПОПУЛЯРНЫЕ РУБРИКИ

НОВОСТИ МЕДИЦИНЫ САМАРЫ

СТАТЬИ

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА, англ. enzyme-linked immunoSorbent assay, ELISA) — лабораторный иммунологический метод качественного определения и количественного измерения антигенов. В основе метода иммуноферментного анализа (ИФА) лежит принцип взаимодействия иммуносорбента — антигена возбудителя инфекции с выявляемыми антителами и в соединении этого комплекса антиген-антитело с иммуноглобулинами, содержащим ферментную метку.
Иммуноглобулины, применяемые в таких тест-системах, так называемый конъюгат может быть получен на основе антивидовых антител (например, кроличьи антитела против иммуноглобулинов человека) или на основе антител, направленных против человеческих иммуноглобулинов определённого класса (M, G, А).
В зависимости от того, какие антитела использованы, тест-система будет выявлять в исследуемом образце или специфические антитела независимо от их класса, или антитела лишь определённого класса (например, только иммуноглобулин G или только иммуноглобулин M).
Существует несколько методов постановки реакции, однако в настоящее время используются в основном следующая схема:
На лунках тест-планшета зафиксирован антиген возбудителя, который инкубируется с испытуемой сывороткой или плазмой крови. При наличии в них специфических антител происходит связывание их с образованием комплекса антиген-антитело.
При инкубации этого комплекса с мечеными ферментом иммуноглобулинами происходит присоединение их к имеющимся комплексам антиген-антитело, что приводит к взаимодействию субстрата с ферментом и отмечается цветная реакция, интенсивность которой зависит от количества связанных сывороточных антител.
Результат оценивается спектрофотометрически или визуально. По такому принципу построена основная масса тест-систем для иммуноферментной диагностики различных инфекций: ВИЧ-инфекция, вирусные гепатиты, цитомегаловирусная, герпесная, токсоплазменная и другие инфекции.
Однако следует отметить, что иммуноферментный анализ может давать и ложные результаты. Ложноположительные могут возникнуть за счет ревматоидного фактора, представляющего собой иммуноглобулин M против собственных иммуноглобулинов G человека; за счёт антител, образующихся при различных системных заболеваниях, нарушениях обмена или приёме лекарственных препаратов; у новорожденных такие ложноположительные реакции могут возникать за счёт образования в организме ребёнка M-антител к иммуноглобулину G матери. Ложноотрицательные результаты реакции обусловлены конкуренцией между иммуноглобулинами М и G, а также техническими ошибками при постановке реакции.
В зависимости от того, какие антигены используются, все иммуноферментные тест-системы для выявления антител подразделяются на:
Лизатные — в которых используется нативный антиген (лизированный или обработанный ультразвуком возбудитель инфекции, полученный в культуре);
Рекомбинантные — в которых используются полученные генно-инженерным способом белки-аналоги определенных белковых антигенов возбудителя;
Пептидные — использующие химически синтезированные фрагменты белков.
Общее направление развития ИФА-диагностикумов — это направление от лизатных тест-систем, которые принято называть тест-системами первого поколения, к рекомбинантным и пептидным.
Технология получения рекомбинантных белков позволяет получить в достаточно чистом виде аналог любого отдельного антигена.
Для создания высококачественной рекомбинантной тест-системы необходимо из всего антигенного многообразия возбудителя выбрать антигены, которые были бы высокоиммуногенными (то есть, в организме инфицированного человека должны вырабатываться антитела к этим антигенам в достаточно большом количестве) и высокоспецифичными (то есть, характерными лишь для данного возбудителя и не дающими перекрёстных реакций с антителами другой природы).
Кроме того, большое значение имеет качество очистки рекомбинантных белков. В идеальном случае возможно получение рекомбинантной тест-системы практически со 100%-ной специфичностью при высокой чувствительности.
На практике этого не всегда удаётся достичь, однако специфичность лучших рекомбинантных тест-систем приближается к 100 %.
Таким образом, за счёт несомненных преимуществ иммуноферментного анализа: удобства в работе, быстроты, объективности за счет автоматизации учёта результатов, возможности исследования иммуноглобулинов различных классов (что важно для ранней диагностики заболеваний и их прогноза) в настоящее время является одним из основных методов лабораторной диагностики.

Ключевые слова:
- иммунитет
- антигены
- антитела

По материалам сайта: http://www.altermed.ru/

Оценить статью

3
0
Добавлять комментарии могут только зарегистрированные пользователи.
Пожалуйста, зарегистрируйтесь или авторизуйтесь!

Перейти в рубрику Анализы. Статьи
ОБЛАКО ТЭГОВ
аборт   абсцесс   авитаминоз   аденоиды   акация   аквариум   аккупунктура   акт   активированный уголь   активность   активные точки   акушерство   алергия   алкоголизм   алкоголь   алкогольные напитки   аллергия   аллопатия   аминокислоты   анализ крови   анализы   анализы крови   анальгетики   анафилаксия   ангина   андрология   аневризма   анемия   анестезия   аномалии   аномалия   антибактериальные вещества   антибиотики   антигены   антигистаминные препараты   антиоксидант   антиоксиданты   антиперспирант   антитела   аорта   апельсиновая корка   апноэ сна   аппендикс   аппендицит   аппетит   аптека   арбуз   армия   ароматерапия   ароматическое масло
Все теги